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?免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)

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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP


蛋白質(zhì)是細胞活性和功能的執(zhí)行者,且蛋白質(zhì)是依靠蛋白間相互作用執(zhí)行功能的,因而研究蛋白的相互作用對于研究細胞活性和功能、解釋生命過程和現(xiàn)象具有重要意義



實驗原理


免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法,屬于免疫沉淀技術(shù)的一類,常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計理念是,假設(shè)一種已知蛋白是某個大的蛋白復(fù)合物的組成成員,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個蛋白復(fù)合物從溶液中“拉”下來(常說的“pull-down”),進而可以用于鑒定這個蛋白復(fù)合物中的其他未知成員。免疫共沉淀的特點可以概括為兩點,第一是天然狀態(tài),第二是蛋白復(fù)合物。



實驗方法


1. 預(yù)清洗beads。

2. 取蛋白樣品分成input,igG組和目標(biāo)抗體組進行IP。

3. 取出預(yù)清洗的beads. 加入 IP用的目標(biāo)抗體和igG在rotator進行IP反應(yīng)過夜。

4. IP過夜后收取蛋白

5. 通過SDS-PAGE和Western Blot或質(zhì)譜進行檢測。




結(jié)果展示


蛋白相互作用分析(圖1)蛋白相互作用分析(圖2)


實驗周期及交付標(biāo)準


1. 實驗周期:3-5周

2. 交付標(biāo)準:完整實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)、原始數(shù)據(jù)等



需確認信息


1. 目的蛋白及信息

2. 樣本種屬及類型

3.是否提供一抗



蛋白相互作用分析(圖2)